那你们现在是怎么解决的?”杨煦开始套话。
江河笑了笑,心中了然,便详细地讲解了一下:
“双重氯仿抽提,加糖原共沉淀,第一次加氯仿离心后,吸取上清液,移入新的离心管,再加一次等体积的氯仿进行第二次离心,这样可以最大限度去除蛋白污染,浓度不够的问题,就在加异丙醇沉淀前,补5微升5g/i的糖原作为共沉淀剂。”
杨煦连连点头。
半小时后,两人提著一袋橘子,来到学校实验室。
听到推门声,众人抬起头。
“杨主任?”
“老大?”
“来来来,大家先停一下手里的活,休息十分钟。”杨煦热情地招呼著,“这是我跟江河特意给你们带的沙糖橘,尝尝,甜得很。”
众人闻言,纷纷围了过来。
王晓晴也拿起一个橘子剥开。
杨煦状似自然的站到王晓晴旁边。
随口说道:
“我看你们这进度,是在做rna提取的最终洗涤吧?”
王晓晴点头:“嗯,江河刚定下的方案,这批是用双重氯仿法跑的,还在等离心结果。”
“双重氯仿法,是个好思路。”
杨煦道:“血清样本和组织样本不一样,trizol试剂用在血清上,最大的痛点就是蛋白含量超标,你们在吸取水相上清液的时候,稍有不慎就会把中间的蛋白层带出来,这会导致下游逆转录直接失败。”“所以,牺牲第一次的取液量来换取纯度是极其必要的,把第一次吸出的上清液,再加一次等体积的氯仿,剧烈震荡后进行二次离心,这样一来,蛋白杂质基本就被洗干净了。”
几个学生都纷纷点头。
杨教授不愧厉害。
说的跟江河说的一模一样。
王晓晴也有些意外地看向杨煦:
“杨主任,你对基础分子实验也这么有研究?”
杨煦故作谦虚:“医学是不分家的嘛,临床和基础本来就是相辅相成的,再说了,你们这套方案,为了补足二次抽提带来的浓度流失,肯定在沉淀前加了东西吧?”
王晓晴再度惊讶,乖巧点头:“确实。”
“5微升,5g/i的糖原,糖原作为共沉淀剂,不影响下游的pcr扩增,还能让微量的rna在管底形成肉眼可见的沉淀团块,我说的对吧?”
“对的对的。”
王晓晴觉得杨煦有点厉害了