学校的实验室条件没那么好。
空调老化,地方不大,房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。 陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs16网吧赛。 时过境迁。
曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反复吹打。
王晓晴观察片刻后说:“测一下吧。 “
蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧台式电脑上点击了测量。 屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活,转头问道:“多少? “
蔡卓群:”浓度12ng/ul,a260/280比值是132,a260/230比值是07。 “王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:”这已经是第四批废样“
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入ds0的方法,解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题
现在的瓶颈,卡在了提取上。
irna在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在18到20之间,低于18就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。 而a260/230比值只有07,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。 蔡卓群试图寻找原因:“王教授,是不是氯仿的用量不够? 我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。 “
王晓晴摇摇头:”上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。 “
陆晓林在一旁分析:”血清里全是蛋白,游离的核酸少,tr izol提取法,用在血清上,天生就有缺陷。 “
实验室众人,陷入沉默。
其实在后世,有专门针对血清